G蛋白偶联受体（GPCR）属于膜蛋白，膜蛋白的膜内区域具有广泛的疏水表面，从膜上解离下来后在极性的水溶液中难以稳定存在，往往无法使用常规的结晶方法获得其结构信息。
人胰高血糖素受体（GCGR）是B类GPCR家族的成员，对葡萄糖的平衡至关重要，有望成为糖尿病和肥胖症治疗的潜在药物靶点。本研究通过冷冻电镜单颗粒法解析了GCGR与其同源配体胰高血糖素和异源三聚体Gs或Gi1蛋白的结构，以研究GCGR与G蛋白相互作用的分子机制。
GCGR表达量极低，难以进行后续的纯化实验。为了获得合适可进一步实验的蛋白复合物，不断对载体和表达系统进行调整摸索。并在蛋白表达过程中加入单克隆片段，以增加复合物的稳定性。
在蛋白制样阶段，蛋白样品大多停留在载网支持膜上，而非支持膜孔的冰层中。且蛋白样品存在较严重的取向优势。
通过改变蛋白样品的浓度，更换载网类型，最终使样品大量入孔。通过增加冷冻冰层的厚度，在载网上铺设碳膜，平均不同取向的颗粒数，使蛋白颗粒的优势取向得到改善。
通过数据处理和三维重构，得到glucagon-GCGR–G蛋白复合物的结构信息。
请与我们的服务团队进一步沟通
+86 18962587269（微信同号）
江苏省苏州市常熟高新技术产业 开发区贤士路 88 号 6 幢1001
contact@readcrystal.com
版权所有 © Copyright 2024 苏州青云瑞晶生物科技有限公司 苏ICP备2021032617号
