MRGPRX2复合物

背景

MRGPRX2是一种主要表达于皮肤肥大细胞的G蛋白偶联受体（GPCR），作为非IgE依赖性肥大细胞激活的关键介质，在新过敏反应分类中被定义为VII型过敏的分子基础。它能够被多种内源性物质（如神经肽P物质、抗菌肽LL-37）和外源性化合物（如阿片类药物）激活，通过Gq蛋白信号通路触发钙离子内流及肥大细胞脱颗粒，释放组胺等炎症介质，引起皮肤红斑、风团及瘙痒等症状。临床研究显示，在慢性自发性荨麻疹和特应性皮炎等疾病中，MRGPRX2及其配体（如LL-37）的表达水平显著升高，且与疾病严重程度正相关，凸显其在过敏性炎症疾病中的重要病理作用。

实验结果

冷冻电镜阶段遇到的问题和解决方法：
一、蛋白纯化阶段，GPCR复合物不稳定，容易发生解聚。使用NanoBit技术对GPCR蛋白进行改造，稳定GPCR复合物。
二、冷冻制样阶段，蛋白样品大多停留在载网支持膜上，而非支持膜孔的冰层中。通过改变蛋白样品的浓度，更换载网类型，最终使样品颗粒大量入孔。
三、结构解析阶段，冷冻数据存在较严重的取向优势问题。通过更换石墨烯载网，倾转样品台并收集倾转数据，获得足够数量不同取向的蛋白颗粒，使取向优势问题得到改善。