从实验室到工业生产,酶的生物催化作用可用于生产多种高价值产品,像利用化学酶合成路径或酶级联反应,能合成从 DNA、复杂药物到由 CO₂衍生甲醇体外合成的淀粉等。此外,生物催化与过渡金属催化、光催化、电催化结合,开辟了新的化学领域,酶能精准控制反应结果,相比传统化学催化,合成步骤少且废物率低。但现实中,能用于化学合成相关反应的酶在自然界少有,多数新应用要发现、设计具不同反应性的酶,或改造现有酶,使其能催化所需反应、接受所需底物,并在应用条件下保持稳定与活性。
青云瑞晶可以帮助客户开发高性能生物催化剂,利用实验和计算工具,定制化筛选或从头开始计算设计新的具有新的生物催化活性的酶,工程改造生物催化剂以改变底物范围,重新设计机制以创造以前未知的反应性。
原酶液溶解并进行蛋白纯化富集
富集液进行分子筛纯化
将各区段样品进行质谱测定或蛋白质重头测序
根据以上结果分析确定前十候选靶标
候选靶标数据库比对进行功能分析验证
靶标蛋白与底物结合建模分析亲和力
亲和力最高靶标蛋白进行异源蛋白表达并检测活力
RBS调控策略构建高效细胞工厂,反应进行20 h后,2-αGG产量达最大值351.8 g/L,转化率达98%。
确定底物及反应信息
酶的数据库构建
底物与酶进行配对筛选进行计算机模拟
根据配对结果的结合强度选取前十靶标进行验证
选择最好靶标进行分子动力学模拟
针对酶的活性口袋及稳定性进行改造提高酶活
底盘菌株构建及高密度发酵
通过基因挖掘和理性改造,提升了脯氨酸羟化酶的转化效率。分子动力学模拟和Rosetta等工具分析显示底物进出loop的改造有利于增加反应中间态的稳定,从而促进脯氨酸羟化。
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