重组蛋白表达

    「青云瑞晶」能够在细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞表达系统中优化出最佳的表达质粒和细胞系,从而提供最佳的蛋白表达方案。


    自公司建立以来,我们已经成功表达了上百种重组蛋白,其中大多数是疾病相关靶点蛋白如STINGIRAK4GPCR蛋白等

    公司具有AKTA FPLC系统、丰富的纯化柱(亲和柱、离子柱、反相柱、疏水柱和分子筛)和配套的质控设备(LC-MS和SEC-MALs等),可纯化蛋白质及其复合物,并鉴定分子量、纯度、均一性和修饰情况等。

蛋白表达与纯化过程

服务内容
原核蛋白表达服务内容

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昆虫表达服务内容


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哺乳动物细胞表达服务内容


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MicroED

 

    「青云瑞晶」创始团队来自瑞典斯德哥尔摩大学MicroED技术的发明团队,公司自购置了国际先进的MicroED测试的平台,面向药企和科研圈提供专业、快速的商业化结构生物学测试服务。包括核酸、病毒、膜蛋白、可溶蛋白、蛋白-核酸复合物、蛋白-小分子复合物等物质,均可进行结构解析。

1. 样品评估

  • 蛋白基本信息

  • 胶图

  • 分子筛图



2. 方案确定&项目报价

  • 交付标准商定

  • 交付周期商定

3. 蛋白表达纯化和结晶筛选/客户准备样品

  • 将有微晶液滴吸出,放入200ul的PCR管中

  • 将微晶液滴对应的池液吸出,放入1.5ml的EP管中

  • 将以上两步的样品放入同一自封袋中

  • 将保温杯寄送


4.样品筛选

  • 微晶液滴冷冻制样

  • 检查是否有蛋白微晶及其结晶性

  • 冷冻检查


5. 数据收集

  • 确定样品的结晶性达到收数据的要求

  • 制定收集数据的方案

  • 收集微晶的衍射数据


6. 数据处理&交付报告

  • 处理收集到的微晶衍射数据

  • 3D模型搭建和优化



服务流程
案例分享

 

    「青云瑞晶」自拥有样品初筛所需的投入冷冻机器人Vitrobot和200KV冷冻透射电镜,为客户提供快速样品评估反馈。此外,公司跟国内多家知名机构深入合作,可以保证即时且充足的300KV冷冻电镜商业机时,样品测试和交付报告没有任何延迟。

Cryo-EM SPA
1. 样品评估

  • 蛋白基本信息

  • 胶图

  • 分子筛图



3. 蛋白表达纯化/客户准备样品并寄送

  • 蛋白体积可少至10 μl

  • 蛋白浓度可低至2 mg/ml

  • 需提供蛋白对应的buffer


2. 方案确定&项目报价

  • 交付标准

  • 交付周期

5. 数据收集

  • 筛查样品

  • 收集二维照片


4. 样品筛选

  • 负染检查

  • 冷冻检查


6. 数据处理&交付报告

  • 给出initial model

  • 给出最终map(包括分辨率)

  • 搭模型(如必要)



服务流程
案例分享
案例(1)(1)

   

     

    「青云瑞晶」自拥有单晶X射线衍射(XRD)平台,同时和国内多家知名机构深入合作,提供同步辐射蛋白晶体线站、液态金属靶X射线仪商业机时,样品测试和交付报告没有任何延迟。

X-ray Diffraction
1. 样品评估

  • 蛋白基本信息

  • 胶图

  • 分子筛图



2. 方案确定&项目报价

  • 交付标准

  • 交付周期

3. 蛋白表达纯化/客户准备样品

  • 准备浓度10mg/ml以上的蛋白样品10mg

  • 干冰寄送

4. 晶体筛选优化

  • 取10ug样品进行SDS-PAGE电泳

  • 用机器人筛选晶体生长条件

  • 优化晶体生长条件

  • 筛选晶体防冻液

  • 晶体衍射能力测试



5. 数据收集

  • 确定样品的结晶性达到收数据的要求

  • 制定收集数据的方案

  • 收集衍射数据


6. 数据处理&交付报告

  • 处理收集到的衍射数据

  • 3D模型搭建和优化



服务流程
案例分享
药物固态研究服务流程

      青云瑞晶拥有全套先进的固态表征设备,如XRPD,DSC,TGA,NMR,FT-IR,LC-MS等,以及国际领先的MicroED微晶电子衍射测试平台,该技术能够快速、准确地解析晶体结构。




单晶培养 & 结构解析
案例分享

       药物活性分子(API)的固态研究应该贯穿整个药物研发阶段。一方面,在药物研发早期,对药物的固体形态进行优势晶型的选择能够起到规避风险的作用;另一方面,对于仿制药企来说,通过研发不同的药物晶型并请求专利保护,能够绕开原研药厂的专利屏障,在与原研药企的竞争中另辟蹊径,从而在市场中博取一席之地。


       在药物研发过程中,很少能够得到各个固体形态的完美晶体实现单晶解析,这一问题制约了药物的研发进程。而 MicroED 技术能够越过单晶培养这一过程,直接在药物研发初期对粉末晶体进行结构解析。根据不同药物固态的结构预测其理化性质及工艺可行性,实现对优势晶型的初步筛选,从而加速小分子药物的固态研究。



晶型、盐型筛选
晶型专利保护 & 突破

       对于小分子化学药物来说,晶型专利是仅次于化合物专利之后的第二重要的物质实体发明专利。可以说晶型专利撰写是否严密,申请布局是否全面直接影响着晶型专利的稳定性,进而影响专利期药物的生命周期和企业利润。对于仿制药企来说,通过研发不同的药物晶型能够有效实现原研药厂的专利突破。


       传统的SCXRD只适用于结构堪称完美的大单晶样品。对于很多虽然能够结晶,但由于本身的生长特性,更倾向于生长成为针状,或者对于本身难以结晶的药物分子来说,并不是快速、高效的结构解析工具。对于XRPD来说,也必须在单晶结构基础之上才能获得纯净晶型的XRPD图谱。

 

       MicroED 作为一种全新的结构解析技术,只需要少量百纳米的晶体,就可以获取高质量的电子衍射图,大幅降低了对晶体样品的质量和尺寸要求。其结构解析的成功率和效率相对于X射线衍射方法有显著的提升。

原料药、制剂质量研究

 晶型杂质质量控制              

 制剂工艺转晶工艺控制

 结晶工艺质量控制

 一致性评价

 XRPD单峰拟合,精度5%

 XRPD全谱拟合,精度0.5%

 程序全自动化分析

       药物开发过程中原料药会经过放大生产和制剂加工,这其中生产单位需要针对量产产品进行样品抽检以明确产品质量。原料药晶型纯度是其中的重要指标,API粉末产品的晶型纯度通常是根据XRPD数据来判断,采用该方法的前提是能够得到纯净晶型粉末的XRPD数据,这依赖于单晶结构的确认。只要获得特定晶型的单晶结构,通过模拟XRPD数据就可以明确质量控制的标准,进而科学的优化生产流程及产品质量。

案例(1)(1)(1)(1)(1)
水合碳酸镧Rietveld 全谱拟合法定量分析出碱式碳酸镧II型杂质含量为1%
服务特点
服务范围
案例分析